search
ruРусский
banner
Дом / Блог / Персонализированные РНК-неоантигенные вакцины стимулируют Т-клетки при раке поджелудочной железы
Блог
pageSearch
Последние новости

Персонализированные РНК-неоантигенные вакцины стимулируют Т-клетки при раке поджелудочной железы

Sep 01, 2023Sep 01, 2023

Nature, том 618, страницы 144–150 (2023 г.) Процитировать эту статью

173 тыс. доступов

28 цитат

3126 Альтметрика

Подробности о метриках

Аденокарцинома протоков поджелудочной железы (PDAC) приводит к летальному исходу у 88% пациентов1, однако содержит мутационные неоантигены Т-клеток, пригодные для вакцинации2,3. Здесь, в фазе I исследования адъювантного аутогенного цевумерана, индивидуальной неоантигенной вакцины на основе наночастиц мРНК уридина и липоплекса, мы синтезировали мРНК неоантигенные вакцины в реальном времени из хирургически удаленных опухолей PDAC. После операции мы последовательно назначали атезолизумаб (иммунотерапия против PD-L1), аутогенный цевумеран (максимум 20 неоантигенов на пациента) и модифицированную версию схемы химиотерапии, состоящей из четырех препаратов (mFOLFIRINOX, включающую фолиновую кислоту, фторурацил, иринотекан и оксалиплатин). Конечные точки включали индуцированные вакциной неоантигенспецифические Т-клетки по данным высокопороговых анализов, 18-месячную безрецидивную выживаемость и онкологическую осуществимость. Мы лечили 16 пациентов атезолизумабом и аутогенным цевумераном, затем 15 пациентов мФОЛФИРИНОКСом. Аутоген цевумеран вводился в течение 3 дней после установленного времени, был переносимым и индуцировал de novo высокоамплитудные неоантиген-специфические Т-клетки у 8 из 16 пациентов, причем половина из них была нацелена на более чем один вакцинный неоантиген. Используя новую математическую стратегию для отслеживания клонов Т-клеток (CloneTrack) и функциональные анализы, мы обнаружили, что Т-клетки, размноженные вакциной, составляют до 10% всех Т-клеток крови, повторно размножаются с помощью бустерной вакцины и включают долгоживущий полифункциональный неоантиген. -специфические эффекторные CD8+ Т-клетки. При медиане 18-месячного наблюдения пациенты с Т-клетками, увеличенными с помощью вакцины (респондеры), имели более длительную медиану безрецидивной выживаемости (не достигнута) по сравнению с пациентами без Т-клеток, увеличенных с помощью вакцины (неответившие; 13,4 месяца, P = 0,003). Различия в иммунной подготовленности пациентов не искажали эту корреляцию, поскольку у ответивших и не ответивших на вакцину был установлен эквивалентный иммунитет к одновременной неродственной мРНК-вакцине против SARS-CoV-2. Таким образом, адъювант атезолизумаб, аутогенный цевумеран и mFOLFIRINOX индуцируют значительную активность Т-клеток, которая может коррелировать с отсроченным рецидивом PDAC.

PDAC является третьей по значимости причиной смертности от рака в США4 и седьмой в мире5. По прогнозам, при росте заболеваемости6 и уровне выживаемости в 12%1, который остается практически неизменным в течение почти 60 лет1, к 2025 году PDAC станет причиной еще большего числа случаев смерти от рака во всем мире (ссылки 6,7). Хирургическое вмешательство является единственным методом лечения PDAC. Тем не менее, несмотря на хирургическое вмешательство, почти у 90% пациентов наблюдается рецидив заболевания в среднем через 7–9 месяцев8,9, а 5-летняя общая выживаемость (ОВ) составляет лишь 8–10%8,9. Хотя адъювантная мультиагентная химиотерапия задерживает рецидив и является стандартом лечения при хирургически удаленном PDAC, почти у 80% пациентов рецидив заболевания наблюдается примерно через 14 месяцев4, а их 5-летняя выживаемость составляет <30%10. Радиация, биологические препараты и таргетная терапия также неэффективны4.

PDAC почти полностью нечувствительны (частота ответа <5%11,12) к ингибиторам иммунных контрольных точек. Эта нечувствительность частично объясняется тем фактом, что PDAC имеют низкую частоту мутаций, которая генерирует мало неоантигенов12, генерируемых мутациями белков, отсутствующих в здоровых тканях, которые маркируют рак как чужеродный для Т-клеток, что потенциально делает PDAC слабо антигенными с небольшим количеством инфильтрирующих Т-клеток. Однако недавние наблюдения показали, что большинство PDAC на самом деле содержат больше неоантигенов2,3,13, чем предполагалось ранее14. Кроме того, исследования долговременно выживших после PDAC2,3 показали, что неоантигены могут стимулировать Т-клетки в PDAC. Первичные опухоли, обогащенные иммуногенными неоантигенами, также содержат примерно в 12 раз более высокую плотность активированных CD8+ Т-клеток, что коррелирует с отсроченным рецидивом заболевания и более длительной выживаемостью пациентов. Таким образом, поскольку большинство PDAC содержат неоантигены, способные стимулировать Т-клетки, стратегии доставки неоантигенов могут индуцировать неоантиген-специфические Т-клетки и влиять на результаты лечения пациентов.

2,000 spots per million bulk PBMCs (Fig. 1g). Inter-patient variation in the number and magnitude of all responses and intra-patient variation in the magnitude of polytopic responses were observed (Fig. 1g). Thus, autogene cevumeran induces substantial de novo T cell responses in a large proportion of patients with PDAC./p>12 weeks35,36,37 after surgery. Furthermore, given its limited sample size, this trial enrolled only white individuals. Future studies must test individualized mRNA neoantigen vaccines in a diverse population of patients with PDAC, coupled with a faster time to adjuvant mFOLFIRINOX. Experience with individualized cancer vaccines16 that predated and accelerated mRNA-based SARS-CoV-2 pandemic vaccines38 can now further hasten individualized cancer vaccine manufacture times22,23 and enable more rapid adjuvant custom vaccination and chemotherapy./p>90% viability), at a concentration between 700 and 1,000 cells per µl, was loaded onto to a 10x Genomics Chromium platform to generate Gel Beads-in-Emulsion (GEM), targeting about 10,000 single cells per sample. After GEM generation, polyA cDNA barcoded at the 5′ end by the addition of a template switch oligonucleotide (TSO) linked to a cell barcode and unique molecular identifiers (UMIs) was generated by incubation at 53 °C for 45 min in a C1000 Touch Thermal cycler with a 96-Deep Well Reaction module (Bio-Rad). GEMs were broken and the single-strand cDNA was cleaned up using DynaBeads MyOne Silane Beads (Thermo Fisher Scientific). The cDNA was amplified for 13 cycles (98 °C for 45 s; 98 °C for 20 s, 67 °C for 30 s, 72 °C for 1 h). Quality and quantity of the cDNA was assessed using an Agilent Bioanalyzer 2100, obtaining a product of about 1,600 bp. For generation of 5P expression libraries, an aliquot of the cDNA (about 50 ng) was enzymatically fragmented, end repaired, A-tailed, subjected to a double-sided size selection with SPRI select beads (Beckman Coulter) and ligated to adaptors provided in the kit. A unique sample index for each library was introduced through 14 cycles of PCR amplification using the indexes provided in the kit (98 °C for 45 s; 98 °C for 20 s, 54 °C for 30 s, and 72 °C for 20 s × 14 cycles; 72 °C for 1 min; held at 4 °C). Indexed libraries were subjected to a second double-sided size selection, and libraries were then quantified using Qubit fluorometric quantification (Thermo Fisher Scientific). The quality was assessed on an Agilent Bioanalyzer 2100, obtaining an average library size of 430 bp. For generation of full-length TCR VDJ regions, an aliquot of the cDNA (about 5 ng) was subjected to nested PCR amplification with specific VDJ outer and inner primer pairs (98 °C for 45 s; 98 °C for 20 s, 67 °C for 30 s, and 72 °C for 20 s × 8 cycles; 72 °C for 1 min; held at 4 °C), and one-sided size selection using SPRI select beads. Quality and quantity of the VDJ region was assessed using an Agilent Bioanalyzer 2100. The average library size was 620 bp./p>A; dHsaCP2000106 for TP53 WT). Cycling conditions were tested to ensure optimal annealing and extension temperatures and optimal separation of positive from empty droplets. Optimization was done using a known positive control./p>

Предыдущий: Исследование показало, что в бумажных трубочках концентрация «вечных химикатов» выше, чем в пластике Следующий: Исследователи обнаружили единственную форму, которая апериодически закрывает плоскость без отражения
Отправить запрос
Отправлять